Majaribio ya kutenganisha protini ya seramu na Cellulose Acetate Membrane Electrophoresis

Kanuni

Electrophoresis ya filamu ya acetate ya selulosi ni njia ya elektrophoresis kwa kutumia filamu ya selulosi ya acetate kama msaada. Jambo ambalo chembe za kushtakiwa huhamia kuelekea electrode kinyume chini ya hatua ya uwanja wa umeme inaitwa electrophoresis. Kwa kuwa kila protini ina sehemu maalum ya isoelektiki, ikiwa protini itawekwa kwenye suluhu yenye pH ya chini kuliko sehemu yake ya isoelectric, protini itachajiwa vyema na kuelekea kwenye elektrodi hasi. Kinyume chake, inahamia kwenye pole chanya. Kwa sababu kasi ya molekuli za protini zinazohamia kwenye uwanja wa umeme zinahusiana na malipo yao, sura na ukubwa wa molekuli, protini tofauti zinaweza kutenganishwa na electrophoresis. Seramu ina aina mbalimbali za protini, ambazo zote zina pointi za isoelectric katika pH7.5 au chini. Seramu inapowekwa katika pH 8.6 bafa ili kuendesha electrophoresis, protini zote za seramu huwa na chaji hasi na zitasonga kuelekea upande chanya katika uwanja wa umeme. Kwa kuwa protini mbalimbali za seramu zina malipo tofauti kwa pH sawa, chembe za molekuli ni tofauti kwa ukubwa, na hivyo kasi ya uhamiaji ni tofauti, na hutenganishwa na electrophoresis. Pointi za isoelectric na uzani wa molekuli za protini za seramu zinaonyeshwa kwenye jedwali hapa chini:

Jaribio ni kutenganisha protini tofauti katika seramu ya damu na utando wa selulosi acetate (abbr. CAM) kama nyenzo ya usaidizi. CAM ni aina ya loos yenye povuefilamu yenye sare nzuri, na unene ni 0.1mm-1.5mm, ambayo ina ngozi fulani ya maji.

Vifaa, vyombo na vitendanishi vya CAM Electrophoresis

Sampuli:seramu ya damu ya binadamu yenye afya

Ala:usambazaji wa umeme DYY-6C, tanki ya electrophoresis DYCP-38C, sampuli bora ya upakiaji WD-9404

Vitendanishi

1) membrane ya acetate ya selulosi 7X9cm

2) PH 8.6 suluhisho la bafa ya barbitol (nguvu ya ionic 0.05-0.09, ni muda wa 0.06tid.): chukua 1,84g Diethyl barbituric acid, na kisha chukua 1.03g Diethyl sodium pentobarbital, ongeza maji yaliyoyeyushwa kwenye joto ili kuyeyusha, na utengeneze. hadi 1000 ml;

3) Madoa: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, kuongeza 100ml maji distilled;

4) TBS/T au PBS/T: 45ml 95% ethanol, 5ml glacial asetiki asidi, kuongeza 50ml maji distilled;

5) Suluhisho la Kusafisha: 70ml ethanol isiyo na maji, 30ml asidi asetiki ya glacial.

Mbinu ya Majaribiod

1) Andaa utando: Ingiza utando kwenye suluhisho la bafa ya barbitol 30min-8h, na uiondoe, ondoa suluhisho la ziada kwa karatasi ya kunyonya.

2) Sampuli za kupakia: Tofautisha upande mbaya na upande laini wa utando, na uweke alama kwenye mstari katika umbali wa 1.5cm hadi mwisho wa juu kwenye upande mbaya. Pakia sampuli kwa zana bora ya upakiaji ya sampuli kwenye upande mbaya. Kumbuka: Sampuli zinapaswa kupakiwa kwenye upande mbaya wa membrane. Baada ya sampuli za seramu kupenya kikamilifu kwenye membrane, pindua utando, weka upande mbaya (na sampuli) uso chini kwenye tank, na mwisho na sampuli huwekwa kwenye electrode hasi.

3) Electrophoresis: Washa usambazaji wa umeme, 0.4～0.6m A/cm membrane, wakati wa kukimbia ni 30-45 min. Baada ya kukimbia electrophoresis, zima nguvu.

4) Doa na safi: Toa utando kutoka kwenye tangi, na uzamisheit kwenye suluhisho la rangi kwa dakika 5, na kisha uitakase katika suluhisho la kusafisha tena na tena kwa mara 3-4 hadi rangi ya asili iwe wazi. Protini za seramu zinapaswa kuonyeshwa kwenye bendi, na kwa kawaida kuna kanda tano, fomu ya mwisho ya mstari wa alama, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.

5) Kuhifadhi: kuweka electrophoresis kavubendikatika suluhisho la kusafisha kwa dakika 10-15, kisha uichukue na kuiweka kwenye glasi safi, baada ya kukauka, itakuwa filamu ya uwazi.bendi.

JaribioMatokeo

Athari ya mgawanyo wa sampuli za seramu ni nzuri, na hakuna uzushi wa mkia wa bendi. Kurudiwa kwa matokeo hutofautiana kutokana na taratibu za mtihani na mbinu za majaribio, na kurudia ni juu.

Hitimisho

Mfumo wa haraka wa kugundua electrophoresis ya kliniki (Tangi ya electrophoresisDYCP-38C,usambazaji wa nguvuDYY-6C na sampuli bora ya upakiaji WD-9404) zinazozalishwa na yetukampuni ya Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdinakidhi mahitaji ya majaribio,namatokeo ni reproducible, rahisi na ya haraka, yanafaa kwakufundishautafiti.

Beijing LiuyiBiotechnology Co., Ltd inataalam katika utengenezaji wa bidhaa za elecrtophoresis kwa tasnia ya sayansi ya maisha, ambayoina historia ya zaidi ya miaka 50 nchini China na kampuni inaweza kutoa bidhaa imara na za ubora wa juu duniani kote. Kupitia miaka ya maendeleo, inastahili chaguo lako!

Sasa tunatafuta washirika, tanki la electrophoresis la OEM na wasambazaji wanakaribishwa.

Kwa habari zaidi kuhusu sisi, tafadhali wasiliana nasi kwa barua pepe[barua pepe imelindwa]au[barua pepe imelindwa].