Kanuni ya Majaribio
Electrophoresis ya hemoglobin inalenga kuchunguza na kuthibitisha hemoglobini mbalimbali za kawaida na zisizo za kawaida.
Kutokana na malipo tofauti na pointi za isoelectric za aina tofauti za hemoglobini, katika ufumbuzi fulani wa pH buffer, wakati hatua ya isoelectric ya hemoglobini iko chini kuliko pH ya ufumbuzi wa bafa, himoglobini hubeba chaji hasi na huhamia kwenye anode wakati wa electrophoresis. Kinyume chake, hemoglobini yenye malipo mazuri huenda kuelekea cathode.
Chini ya voltage fulani na baada ya muda maalum wa electrophoresis, hemoglobini zilizo na malipo tofauti na uzito wa molekuli huonyesha mwelekeo tofauti wa uhamiaji na kasi. Hii inaruhusu kutenganishwa kwa kanda tofauti, na uchanganuzi unaofuata wa rangi ya rangi au electrophoretic unaweza kufanywa kwenye kanda hizi ili kuhesabu hemoglobini mbalimbali. Njia inayotumika zaidi ni pH 8.6 selulosi acetate membrane electrophoresis.
Ndani ya saitoplazimu, vikundi vya ethilini glikoli (CHOH-CHOH) vilivyo katika glycogen au vitu vya polysaccharide (kama vile mucopolysaccharides, mucoproteins, glycoproteins, glycolipids, nk) hutiwa oksidi na asidi ya mara kwa mara na kubadilishwa kuwa vikundi vya aldehyde (CHO-CHO). Vikundi hivi vya aldehidi huchanganyika na kitendanishi cha Schiff kisicho na rangi ya zambarau-nyekundu, na kutengeneza rangi ya zambarau-nyekundu ambayo huweka mahali ambapo lisakariidi zipo kwenye seli. Mwitikio huu unajulikana kama upakaaji wa asidi-Schiff (PAS), hapo awali ulijulikana kama uwekaji wa glycogen.
Mbinu ya Majaribio
Nyenzo:Acetate ya selulosimembrane, vifaa vya electrophoresis(DYCP-38C na usambazaji wa umeme DYY-6C), Zana ya Kupakia Sampuli Bora (pipette), spectrophotometer, colorimetric cuvettes, vihifadhi.
Bafa:
(1) pH 8.6 TEB Buffer: Pima 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g asidi ya boroni, na ongeza maji yaliyochujwa hadi 1000 ml.
(2) Borate Buffer: Pima 6.87 g borax na 5.56 g asidi ya boroni, na ongeza maji yaliyosafishwa hadi 1000 ml.
Utaratibu:
Purekebishaji wa Suluhisho la Hemoglobini
Chukua 3 ml ya damu iliyo na heparini au citrate ya sodiamu kama anticoagulant. Centrifuge saa 2000 rpm kwa dakika 10 na uondoe plasma. Osha seli nyekundu za damu mara tatu na salini ya kisaikolojia (750 rpm, dakika 5 centrifugation kila wakati). Centrifuge saa 2200 rpm kwa dakika 10 na uondoe supernatant. Ongeza kiasi sawa cha maji yaliyotengenezwa, kisha ongeza mara 0.5 ya kiasi cha tetrakloridi kaboni. Tikisa kwa nguvu kwa dakika 5, na kisha centrifuge saa 2200 rpm kwa dakika 10 kukusanya ufumbuzi wa juu wa Hb kwa matumizi ya baadaye.
Kulowesha Utando
Kata membrane ya selulosi ya acetate kwenye vipande vya kupima 3 cm × 8 cm. Ziloweke katika pH 8.6 TEB bafa hadi zijae kabisa, kisha ziondoe na zikaushe kwa karatasi ya chujio.
Kuweka alama
Tumia bomba ili kuona 10 μl ya myeyusho wa himoglobini kwa wima kwenye utando wa acetate wa selulosi (upande mbaya), karibu sm 1.5 kutoka ukingo.
Electrophoresis
Mimina suluhisho la bafa ya borate kwenye chumba cha electrophoresis. Weka membrane ya selulosi ya acetate na upande wenye madoadoa kwenye mwisho wa cathode ya chumba. Omba kwa 200 V kwa dakika 30.
Elution
Kata kanda za HbA na HbA2, ziweke kwenye zilizopo tofauti za mtihani, na kuongeza 15 ml na 3 ml ya maji yaliyotengenezwa, kwa mtiririko huo. Tikisa kwa upole ili kuondoa hemoglobin kabisa, kisha changanya.
Upimaji wa rangi
Sifuri ufyonzaji kwa kutumia maji yaliyosafishwa kwa myeyusho wa elution na pima ufyonzaji kwa 415 nm.
Hesabu
HbA2(%) = Kutokuwepo kwa mirija ya HbA2 / (Kutoweka kwa mirija ya HbA × 5 + Kutokuwepo kwa mirija ya HbA2) × 100%
Uhesabuji wa Matokeo ya Majaribio
Masafa ya Marejeleo ya pH 8.6 TEB Buffer Cellulose Acetate Electrophoresis: HbA > 95%, HbA2 1% -3.1%
Vidokezo
Wakati wa electrophoresis haipaswi kuwa mrefu sana. Utando wa acetate ya selulosi haipaswi kukauka wakati wa electrophoresis. Acha electrophoresis wakati HbA na HbA2 zimetenganishwa wazi. Electrophoresis ya muda mrefu inaweza kusababisha kuenea kwa bendi na ukungu.
Epuka kutumia sampuli nyingi sana. Kioevu cha hemoglobini kupita kiasi kinaweza kusababisha kutengana kwa bendi au kutoweka madoa kwa kutosha, na kusababisha viwango vya HbA vilivyoinuliwa kwa uwongo.
Zuia uchafuzi wa membrane ya acetate ya selulosi na protini.
Ya sasa haipaswi kuwa juu sana; vinginevyo, bendi za hemoglobini haziwezi kutengana.
Daima jumuisha vielelezo kutoka kwa watu wa kawaida na hemoglobini zisizo za kawaida zinazojulikana kama vidhibiti.
Beijing Liuyi Bioteknolojia inatengeneza tanki ya kitaalamu ya electrophoresis kwa electrophoresis ya hemoglobin ambayo ni mfanoDYCP-38Cselulosi acetate membrane electrophoresis tank, na kuna mifano miwili ya umeme electrophoresis inapatikana kwa selulosi acetate membrane electrophoresis tank.DYY-2CnaDYY-6Cusambazaji wa nguvu.
Wakati huo huo, Beijing Liuyi Bioteknolojia hutoa utando wa selulosi acetate kwa wateja, na ukubwa wa membrane ya selulosi ya acetate inaweza kubinafsishwa. Karibu utuulize sampuli na maelezo zaidi.
Chapa ya Beijing Liuyi ina historia ya zaidi ya miaka 50 nchini Uchina na kampuni inaweza kutoa bidhaa dhabiti na za ubora wa juu kote ulimwenguni. Kupitia miaka ya maendeleo, inastahili chaguo lako!
Sasa tunatafuta washirika, tanki la electrophoresis la OEM na wasambazaji wanakaribishwa.
Ikiwa una mpango wowote wa ununuzi wa bidhaa zetu, tafadhali usisite kuwasiliana nasi. Unaweza kututumia ujumbe kwa barua pepe[barua pepe imelindwa]au[barua pepe imelindwa], au tafadhali tupigie kwa +86 15810650221 au ongeza Whatsapp +86 15810650221, au Wechat: 15810650221
Muda wa kutuma: Sep-20-2023