Polyacrylamide Gel Electrophoresis
Electrophoresis ya gel ni mbinu ya kimsingi katika maabara katika taaluma zote za kibaolojia, kuruhusu utengano wa molekuli kuu kama vile DNA, RNA na protini.Midia na mbinu tofauti za utengano huruhusu seti ndogo za molekuli hizi kutenganishwa kwa ufanisi zaidi kwa kutumia sifa zao za kimwili.Kwa protini hasa, polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) mara nyingi ni mbinu ya uchaguzi.
PAGE ni mbinu inayotenganisha macromolecules kama vile protini kulingana na uhamaji wao wa kielektroniki, yaani, uwezo wa uchanganuzi kuelekea kwenye elektrodi ya chaji kinyume.Katika UKURASA, hii imedhamiriwa na chaji, saizi (uzito wa Masi) na umbo la molekuli.Wachambuzi husogea kupitia pores iliyoundwa katika gel ya Polyacrylamide.Tofauti na DNA na RNA, protini hutofautiana katika malipo kulingana na asidi ya amino iliyojumuishwa, ambayo inaweza kuathiri jinsi zinavyoendesha.Kamba za asidi ya amino pia zinaweza kuunda miundo ya pili ambayo huathiri saizi yao inayoonekana na kwa hivyo jinsi inavyoweza kupita kupitia vinyweleo.Kwa hivyo wakati mwingine inaweza kuhitajika kubadilisha protini kabla ya electrophoresis ili kuzipanga kulingana na makadirio sahihi zaidi ya saizi inahitajika.
UKURASA WA SDS
Sodiamu-dodecyl sulfate ya polyacrylamide gel electrophoresis ni mbinu inayotumiwa kutenganisha molekuli za protini za raia 5 hadi 250 kDa.Protini hutenganishwa tu kwa msingi wa uzito wao wa Masi.Sulfate ya sodiamu ya dodecyl, surfactant ya anionic, huongezwa katika utayarishaji wa jeli ambazo hufunika chaji za asili za sampuli za protini na kuzipa malipo sawa na uwiano wa wingi.Kwa maneno rahisi, ni denatures protini na kuwapa malipo hasi.
UKURASA Asilia
Native PAGE ni mbinu inayotumia jeli zisizo na chembechembe kwa mgawanyo wa protini.Tofauti na SDS PAGE, hakuna wakala wa denaturing huongezwa katika utayarishaji wa jeli.Matokeo yake, mgawanyiko wa protini hufanyika kwa misingi ya malipo na ukubwa wa protini.Katika mbinu hii, mfuatano, mkunjo na minyororo ya asidi ya amino ya protini ni mambo ambayo utengano unategemea.Protini haziharibiki katika mchakato huu, na zinaweza kurejeshwa baada ya kukamilika kwa kujitenga.
Je, elektrophoresis ya jeli ya Polyacrylamide (UKURASA) inafanyaje kazi?
Kanuni ya msingi ya UKURASA ni kutenganisha wachambuzi kwa kuwapitisha kupitia matundu ya gel ya Polyacrylamide kwa kutumia mkondo wa umeme.Ili kufikia hili, mchanganyiko wa acrylamide-bisacrylamide hupolimishwa (polyacrylamide) kwa kuongezwa kwa ammonium persulfate (APS).Mmenyuko, ambao huchochewa na tetramethylethylenediamine (TEMED), hutengeneza muundo kama wavu wenye matundu ambayo wachambuzi wanaweza kusogea (Mchoro 2).Kadiri asilimia ya jumla ya acrylamide iliyojumuishwa kwenye jeli inavyoongezeka, ndivyo saizi ya pore inavyopungua, kwa hivyo ndivyo protini ambazo zitaweza kupita.Uwiano wa acrylamide kwa bisacrylamide pia utaathiri ukubwa wa pore lakini hii mara nyingi huwekwa sawa.Ukubwa wa vinyweleo vidogo pia hupunguza kasi ambayo protini ndogo huweza kupita kwenye jeli, kuboresha mwonekano wao na kuzizuia zisiende kwenye bafa kwa haraka wakati mkondo unatumiwa.
Vifaa kwa ajili ya Polyacrylamide Gel Electrophoresis
Seli ya Gel Electrophoresis (Tangi/Chemba)
Tangi ya gel ya electrophoresis ya gel ya Polyacrylamide (UKURASA) ni tofauti na tanki ya gel ya agarose.Tangi ya gel ya agarose iko mlalo, wakati tangi ya PAGE iko wima.Kwa seli ya wima ya elektrophoresis (tangi/chumba), gel nyembamba (kawaida 1.0mm au 1.5mm) hutiwa kati ya sahani mbili za glasi na kupachikwa ili sehemu ya chini ya jeli iingizwe kwenye buffer kwenye chumba kimoja na sehemu ya juu izame kwenye bafa. katika chumba kingine.Wakati wa sasa unatumika, kiasi kidogo cha buffer huhamia kupitia gel kutoka kwenye chumba cha juu hadi chumba cha chini.Kwa vibano vikali vya kuhakikisha kusanyiko linakaa katika hali ya wima, kifaa hurahisisha uendeshaji wa jeli haraka na hata ubaridi unaosababisha mikanda mahususi.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Bioteknolojia) hutengeneza saizi nyingi za seli za elektrophoresis za jeli ya Polyacrylamide (tanki/vyumba).Mifano ya DYCZ-20C na DYCZ-20G ni seli wima za elektrophoresis (mizinga/vyumba) kwa uchanganuzi wa mpangilio wa DNA.Baadhi ya seli za wima za elektrophoresis (mizinga/vyumba) zinaoana na mfumo wa kufuta, kama vile modeli ya DYCZ-24DN, DYCZ-25D na DYCZ-25E inaoana na modeli ya mfumo wa Uzuiaji wa Magharibi DYCZ-40D, DYCZ-40G na DYCZ-40F, ambayo hutumiwa kuhamisha molekuli ya protini kutoka kwa gel hadi kwenye membrane.Baada ya electrophoresis ya SDS-PAGE, Western Blotting ni mbinu ya kugundua protini maalum katika mchanganyiko wa protini.Unaweza kuchagua mifumo hii ya kufuta kulingana na mahitaji ya majaribio.
Ugavi wa Nguvu za Electrophoresis
Ili kutoa umeme kwa kuendesha gel, utahitaji umeme wa electrophoresis.Katika Liuyi Biotechnology tunatoa aina mbalimbali za vifaa vya umeme vya electrophoresis kwa matumizi yote.Mfano wa DYY-12 na DYY-12C wenye voltage ya juu na ya sasa inaweza kukidhi mahitaji ya juu ya electrophoresis.Ina kazi ya kusimama, muda, VH na maombi ya hatua kwa hatua.Ni bora kwa matumizi ya IEF na DNA ya mpangilio wa electrophoresis.Kwa matumizi ya jumla ya protini na DNA electrophoresis, tuna mfano wa DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, na kadhalika, ambazo pia ni vifaa vya nguvu vya mauzo ya moto na seli za electrophoresis (mizinga / vyumba).Hizi zinaweza kutumika kwa matumizi ya umeme wa kati na wa chini, kama vile matumizi ya maabara ya shule, maabara ya hospitali na kadhalika.Aina zaidi za vifaa vya umeme, tafadhali tembelea tovuti yetu.
Chapa ya Liuyi ina historia ya zaidi ya miaka 50 nchini China na kampuni inaweza kutoa bidhaa dhabiti na za ubora wa juu kote ulimwenguni.Kupitia maendeleo ya miaka, inastahili chaguo lako!
Kwa habari zaidi kuhusu sisi, tafadhali wasiliana nasi kwa barua pepe[barua pepe imelindwa] or [barua pepe imelindwa].
Marejeo ya Polyacrylamide gel electrophoresis ni nini?
1. Karen Steward PhD Polyacrylamide gel electrophoresis, Jinsi Inavyofanya Kazi, Tofauti za Mbinu, na matumizi yake
Muda wa kutuma: Mei-23-2022